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纽荷尔显微镜在医学领域的应用
来源: | 作者:纽荷尔显微镜 | 发布时间 :2024-04-02 | 149 次浏览: | 🔊 点击朗读正文 ❚❚ | 分享到:

一、纽荷尔荧光显微镜常用于医学检查的原理、结构和用途


纽荷尔荧光显微镜是一种光学显微镜,它以紫外线为光源刺激生物标本中的荧光物质,产生各种颜色的荧光。


纽荷尔荧光显微镜由光源、滤色系统、光学系统等主要部件组成。荧光显微镜和普通光学显微镜的主要区别在于光源和滤光片的不同。高压汞灯通常用作光源,可以发出紫外线和短波长的可见光;滤光片有两组。第一组称为激发滤片,位于光源和标本之间。只允许激发标本产生荧光的光通过(如紫外线);第二组是阻断滤片,位于标本和目镜之间,可以吸收剩余的紫外线,只让激发的荧光通过,有利于增强对比度,保护眼睛免受紫外线损伤。光学系统主要由反光镜、聚光镜、目镜、物镜、照明系统等组成。


纽荷尔荧光显微镜可用于观察和检测特殊蛋白质和核酸,可与细胞中的荧光染料特别结合。其标本染色简单,荧光图像颜色鲜艳,敏感性高。


使用荧光显微镜的注意事项:

①观察对象必须是自发荧光或荧光染料染色的标本;

②载玻片、盖玻片、镜油不含自发荧光杂质;

③选择最好的滤片组;

④荧光标本一般不能长时间保存,如果长时间照射(尤其是紫外线),很容易迅速褪色。因此,如果条件允许,应先拍照备案,然后仔细观察标本;

⑤高压汞灯启动后,不得在15分钟内关闭。一旦关闭,汞灯必须冷却后才能打开。严禁频繁打开和关闭,否则汞灯的使用寿命将大大降低;

⑥如果你暂时不观察标本,你可以拉开光幕来阻挡光线。这样可以避免标本不必要的长期照射,减少开闭汞灯的频率和次数;

⑦长时间观察荧光标本时,最好戴能阻挡紫外线的护目镜,加强对眼睛的保护。


二、纽荷尔激光扫描聚焦显微镜的结构特征及其在医学领域的主要用途


激光共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像的基础上安装激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,利用紫外线或可见光激发荧光探针,从而获得细胞或组织内部微结构的荧光图像。此外,在载体平台上增加一个微量步进电机,使载体平台沿Z轴上下移动,将样品的各个层次移动到照明针孔和检测针孔的共焦表面。样品的不同层次的图像可以清晰地显示,并成为连续的光切割图像。


激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)它具有高灵敏度、高分辨率、高放大率等特点。主要用于细胞三维重建、细胞定量荧光测量、细胞钙离子、pH值等离子体的动态分析、细胞间通信和膜的流动性。



三、纽荷尔显微镜的工作原理、结构特点及其主要用途


对比显微镜的基本原理是将透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高各种结构之间的对比度,使各种结构清晰可见。光线通过标本后折射,偏离原光路,延迟1/4λ(波长)如果增加或减少1/4λ,光程差变为1/2λ,两束光合轴后干扰增强,振幅增大或减小,对比度增大。


对比显微镜的结构特点:

①环形光阑(annular  diaphragm) 位于光源和聚光镜之间,使透过聚光镜的光形成空心光锥,聚焦在标本上;

②相位板(annular phaseplate) 在物镜中加入氟化镁相位板,可将直射光或衍射光相位推迟1/4λ,并能吸收直射光(背景光)的光强,使直射光与衍射光的光强趋于一致,能更好地突出干扰效果。


对比显微镜主要用于观察活细胞和未染色标本。


四、纽荷尔偏光显微镜的结构特点、工作原理及其主要用途


纽荷尔偏光显微镜是一种重要的光学仪器,利用光的偏差来观察和研究具有双折射性的晶体和液晶物质(即折射后可分为两束折射光)。


纽荷尔偏光显微镜是在一般显微镜的基础上添加使普通光转化为偏光和检测偏光或观察干扰图案的特殊透镜,即光源前有偏光片(偏光),使进入显微镜的光为偏光,镜筒内有偏光检测器(偏光方向垂直于偏光检测器),该显微镜载体平台可旋转。当载物台没有样品时,无论如何旋转载物台,显微镜中都看不到光线,因为两个偏振片是垂直的。旋转载物台可以检测到这种物体,因为当光线通过这种物质时会发生偏转。移相装置是偏光显微镜在使用过程中不可缺少的附件。全波片、半波片和1/4波片可以分别延迟波片的偏振光π、π和π/2的相位。补偿器可以连续调整,连续改变通过的偏振光相位。对于观察光的偏振性质,移相装置是非常必要的。


五、纽荷尔微分干涉差显微镜原理及其在医学领域的主要用途。



纽荷尔微分干涉差显微镜(DIC): 又称干扰或干扰显微镜。可以看到和测量微小的位相变化,类似于位相显微镜,使无色透明标本具有明暗和颜色变化,从而增强对比度。从起偏镜片中产生的直线偏振光通过光束分解棱镜后,分为两种相互垂直振动的直线偏振光。聚光器折射后,两条光线射向样品。由于样品中每个质点的折射率不同,部分光波的位相发生变化,并因干涉而发生横向偏移。通过物镜后,两条光通过第二组光束分解棱镜,由检偏镜干扰。最终图像的每一点都是由两个相互重叠的不同图像组成的混合图像,这样肉眼就能识别出来。


纽荷尔微干扰差显微镜可以观察细胞、细菌等活体,图像呈立体感,比位相显微镜的图像更细致、更逼真。它可以用来更好地研究活细胞的各个部位。